Кількісне визначення білку по методу Къельдаля Метод визначення загальної кількості азоту, що має столітню історію, носить ім’я датського хіміка Къельдаля; із-за точності і відтворюваності він впродовж століття залишається найбільш використовуваним...
Кількісне визначення білку по методу Къельдаля
Метод визначення загальної кількості азоту, що має столітню історію, носить ім’я
датського хіміка Къельдаля; із-за точності і відтворюваності він впродовж століття
залишається найбільш використовуваним (офіційним) методом для визначення
вміст азоту / білку в харчових продуктах і кормах. З дня першого застосування
метод Къельдаля зазнав багато змін, які в основному були спрямовані на
зменшення споживаної енергії, займаного простору, ваги зразка і
токсичності каталізатора.
Метод Къельдаля можна розбити на три стадії:
- дижестирование (мокре озолення);
- дистиляція;
- титрування.
Дижестирование – це мінералізація гомогенізованого зразка в середовищі
концентрирован-ной сірчаної кислоти у присутності каталізатора. Результатом
мінералізації являється розчин, що містить сульфат амонія :
Органічний N H2SO4 = (NH4) 2so4 H2O CO2↑ та ін.
Дистиляція. У присутності надлишку лугу NH4
перетворюється на NH3, який
можна відокремити від дижестированного зразка перегонкою з парою.
(NH4) 2so4 2naoh = 2nh3↑ 2h2o Na2SO4.
Титрування. Аміак, кількісно перегнаний з парою, збирається в
поглинаючому розчині. Вміст азоту в зразку визначається кількістю
поглиненого аміаку. Титрування проводять з використанням кольорових індикаторів
чи методом потенціометра. Існує два методи титрування : пряме і
зворотне.
У разі зворотного титрування (застосовується для макро-методу Къельдаля) в якості
поглинаючого розчину використовується точно виміряний об’єм стандартного розчину
кислоти (сірчаною, соляною) :
2h2so4 2nh3 = (NH4) 2so4 H2SO4 (надлишок);
Надлишок кислоти титрують розчином лугу :
(NH4) 2so4 H2SO4 (надлишок) 2naoh = (NH4) 2so4 Na2SO4 2h2o.
При прямому титруванні замість стандартизованого розчину сильної кислоти
використовують розчин борної кислоти. Перегнаний аміак утримується в розчині за
рахунок утворення комплексу амонійного борату : H3BO3 NH3 = (NH4H2BO3) H3BO3
(надлишок);
Освічений комплекс амонійного борату титрують стандартним розчином
кислоти:
2 (NH4H2BO3) H2SO4 = (NH4) 2so4 2h3bo3
Пряме титрування зручніше, оскільки припускає використання тільки одного
стандартного розчину.
Схема кількісного визначення азоту по Къельдалю:
- Перемолоти або гомогенізувати зразок;
- Зважити або відібрати піпеткою зразок;
- Кількісно перенести зразок в пробірки;
- Додати кислоту і сіль для підвищення температури кипіння;
- Додати каталізатор, якщо він не містився в кислоті;
- Помістити пробірки в дижестор DK6 або DK20;
- Минерализовать (дижестировать) зразок;
- Охолодити пробірки;
- Помістити склянку для збору дистиляту в дистилятор UDK;
- Запустити запрограмований цикл дистиляції;
- Оттитровать дистилят ( можливо, за допомогою автоматичного титратора);
- Вичислити результати.
-стадия сульфатної мінералізації образца-
Програмований мінералізатор
Електронний програматор з мікропроцесором для
встановлення температури і часу дижестирования
(значення температури від кімнатної до 450 ºЗ, часу – до
120 хвилин). Звуковий сигнал закінчення циклу
дижестирования. До 4 інтервалів для температури і
часу дижестирования. Є можливість продовження
операції дижестирования, якщо це необхідно.
Відповідає нормам GLP : виходи на комп’ютер і на
принтер.
У комплект постачання входить 6 скляних воронок для
фільтрування (використовуються як зворотні
холодильників).
Утримувач пробірок із захисними екранами.
Пробірки для мінералізації ø 42 x 300 мм (3 шт.) –
4 комплекти (Σ =12 пробірок).
Каталізатор, використовуваний для сульфатного
дижестирования при визначенні протеїну (білка) по методу
Къельдаля (упаковка – 1000 пігулок).
Човники для зважування з безазотной паперу MN
808, 58 х 10 х 10 мм, 100 штук.
Паровий дистилятор
Використовують для визначення азоту по методу
Къельдаля, зміст спиртів, аміаку, ціаніду
фенолу, летких кислот і в інших застосуваннях. Для
роботи приладу слід використати
деіонізовану або дистильовану воду.
Робить 100 мл дистиляту за 5 хвилин.
Додавання об’єму лугу і тривалість
процесу перегонки програмується перед
початком робочого циклу.
У комплект постачання входять:
Пробірка 42х300 мм, колба конічна на 250 мл
щипці для пробірки, набір шлангів для підведення і
відведення охолоджувальної води
Газовідвідна кришка
Скрубер SMS – призначений для всмоктування токсичних і корозійних газів, що утворюються при окислювальній мінералізації і інших процесах.
Рециркуляционный насос типу JP.
Рециркуляционный водяний вакуумний насос.
Продуктивність – 35 л/хв.
