Количественное определение белка по методу Къельдаля Метод определения общего количества азота, имеющий столетнюю историю, носит имя датского химика Къельдаля; из-за точности и воспроизводимости он в течение столетия остается наиболее используемым...
Количественное определение белка по методу Къельдаля
Метод определения общего количества азота, имеющий столетнюю историю, носит имя
датского химика Къельдаля; из-за точности и воспроизводимости он в течение столетия
остается наиболее используемым (официальным) методом для определения
содержания азота / белка в пищевых продуктах и кормах. Со дня первого применения
метод Къельдаля претерпел много изменений, которые в основном были направлены на
уменьшение потребляемой энергии, занимаемого пространства, веса образца и
токсичности катализатора.
Метод Къельдаля можно разбить на три стадии:
- дижестирование (мокрое озоление);
- дистилляция;
- титрование.
Дижестирование – это минерализация гомогенизированного образца в среде
концентрирован-ной серной кислоты в присутствии катализатора. Результатом
минерализации является раствор, содержащий сульфат аммония:
Органический N + H2SO4 = (NH4)2SO4 + H2O + CO2↑ + и др.
Дистилляция. В присутствии избытка щелочи NH4
+ превращается в NH3, который
можно отделить от дижестированного образца перегонкой с паром.
(NH4)2SO4 + 2NaOH = 2NH3↑ + 2H2O + Na2SO4.
Титрование. Аммиак, количественно перегнанный с паром, собирается в
поглощающем растворе. Содержание азота в образце определяется количеством
поглощенного аммиака. Титрование проводят с использованием цветных индикаторов
или потенциометрическим методом. Существует два метода титрования: прямое и
обратное.
В случае обратного титрования (применяется для макро-метода Къельдаля) в качестве
поглощающего раствора используется точно измеренный объем стандартного раствора
кислоты (серной, соляной):
2H2SO4 + 2NH3 = (NH4)2SO4 + H2SO4(избыток);
Избыток кислоты титруют раствором щелочи:
(NH4)2SO4 + H2SO4(избыток) + 2NaOH = (NH4)2SO4 + Na2SO4 + 2H2O.
При прямом титровании вместо стандартизированного раствора сильной кислоты
используют раствор борной кислоты. Перегнанный аммиак удерживается в растворе за
счет образования аммонийно-боратного комплекса: H3BO3 + NH3 = (NH4H2BO3) + H3BO3
(избыток);
Образованный аммонийно-боратный комплекс титруют стандартным раствором
кислоты:
2 (NH4H2BO3) + H2SO4 = (NH4)2SO4 + 2H3BO3
Прямое титрование более удобно, так как предполагает использование только одного
стандартного раствора.
Схема количественного определения азота по Къельдалю:
- Перемолоть или гомогенизировать образец;
- Взвесить или отобрать пипеткой образец;
- Количественно перенести образец в пробирки;
- Добавить кислоту и соль для повышения температуры кипения;
- Добавить катализатор, если он не содержался в кислоте;
- Поместить пробирки в дижестор DK6 или DK20;
- Минерализовать (дижестировать) образец;
- Охладить пробирки;
- Поместить стакан для сбора дистиллята в дистиллятор UDK;
- Запустить запрограммированный цикл дистилляции;
- Оттитровать дистиллят ( возможно, с помощью автоматического титратора);
- Вычислить результаты.
-стадия сульфатной минерализации образца-
Программируемый минерализатор
Электронный программатор с микропроцессором для
установления температуры и времени дижестирования
(значение температуры от комнатной до 450 ºС, времени – до
120 минут). Звуковой сигнал окончания цикла
дижестирования. До 4 интервалов для температуры и
времени дижестирования. Есть возможность продолжения
операции дижестирования, если это необходимо.
Соответствует нормам GLP: выходы на компьютер и на
принтер.
В комплект поставки входит 6 стеклянных воронок для
фильтрования (используются в качестве обратных
холодильников).
Держатель пробирок с защитными экранами.
Пробирки для минерализации ø 42 x 300 мм (3 шт.) –
4 комплекта (Σ =12 пробирок).
Катализатор, используемый для сульфатного
дижестирования при определении протеина (белка) по методу
Къельдаля (упаковка – 1000 таблеток).
Лодочки для взвешивания из безазотной бумаги MN
808, 58 х 10 х 10 мм, 100 штук.
Паровой дистиллятор
Используют для определения азота по методу
Къельдаля, содержания спиртов, аммиака, цианида,
фенола, летучих кислот и в других приложениях. Для
работы прибора следует использовать
деионизированную или дистиллированную воду.
Производит 100 мл дистиллята за 5 минут.
Добавление объема щелочи и длительность
процесса перегонки программируется перед
началом рабочего цикла.
В комплект поставки входят:
Пробирка 42х300 мм, колба коническая на 250 мл,
щипцы для пробирки, набор шлангов для подвода и
отвода охлаждающей воды
Газоотводная крышка
Скруббер SMS – предназначен для всасывания токсичных и коррозионных газов, образующихся при окислительной минерализации и других процессах.
Рециркуляционный насос типа JP.
Рециркуляционный водяной вакуумный насос.
Производительность – 35 л/мин.
