Кількісне визначення білку по методу Къельдаля Метод визначення загальної кількості азоту, що має столітню історію, носить ім’я датського хіміка Къельдаля; із-за точності і відтворюваності він впродовж століття залишається найбільш використовуваним...

Кількісне визначення білку по методу Къельдаля

Метод визначення загальної кількості азоту, що має столітню історію, носить ім’я

датського хіміка Къельдаля; із-за точності і відтворюваності він впродовж століття

залишається найбільш використовуваним (офіційним) методом для визначення

вміст азоту / білку в харчових продуктах і кормах. З дня першого застосування

метод Къельдаля зазнав багато змін, які в основному були спрямовані на

зменшення споживаної енергії, займаного простору, ваги зразка і

токсичності каталізатора.

Метод Къельдаля можна розбити на три стадії:

  • дижестирование (мокре озолення);
  • дистиляція;
  • титрування.

Дижестирование – це мінералізація гомогенізованого зразка в середовищі

концентрирован-ной сірчаної кислоти у присутності каталізатора. Результатом

мінералізації являється розчин, що містить сульфат амонія :

Органічний N H2SO4 = (NH4) 2so4 H2O CO2↑ та ін.

Дистиляція. У присутності надлишку лугу NH4

перетворюється на NH3, який

можна відокремити від дижестированного зразка перегонкою з парою.

(NH4) 2so4 2naoh = 2nh3↑ 2h2o Na2SO4.

Титрування. Аміак, кількісно перегнаний з парою, збирається в

поглинаючому розчині. Вміст азоту в зразку визначається кількістю

поглиненого аміаку. Титрування проводять з використанням кольорових індикаторів

чи методом потенціометра. Існує два методи титрування : пряме і

зворотне.

У разі зворотного титрування (застосовується для макро-методу Къельдаля) в якості

поглинаючого розчину використовується точно виміряний об’єм стандартного розчину

кислоти (сірчаною, соляною) :

2h2so4 2nh3 = (NH4) 2so4 H2SO4 (надлишок);

Надлишок кислоти титрують розчином лугу :

(NH4) 2so4 H2SO4 (надлишок) 2naoh = (NH4) 2so4 Na2SO4 2h2o.

При прямому титруванні замість стандартизованого розчину сильної кислоти

використовують розчин борної кислоти. Перегнаний аміак утримується в розчині за

рахунок утворення комплексу амонійного борату : H3BO3 NH3 = (NH4H2BO3) H3BO3

(надлишок);

Освічений комплекс амонійного борату титрують стандартним розчином

кислоти:

2 (NH4H2BO3) H2SO4 = (NH4) 2so4 2h3bo3

Пряме титрування зручніше, оскільки припускає використання тільки одного

стандартного розчину.

Схема кількісного визначення азоту по Къельдалю:

  1. Перемолоти або гомогенізувати зразок;
  2. Зважити або відібрати піпеткою зразок;
  3. Кількісно перенести зразок в пробірки;
  4. Додати кислоту і сіль для підвищення температури кипіння;
  5. Додати каталізатор, якщо він не містився в кислоті;
  6. Помістити пробірки в дижестор DK6 або DK20;
  7. Минерализовать (дижестировать) зразок;
  8. Охолодити пробірки;
  9. Помістити склянку для збору дистиляту в дистилятор UDK;
  10. Запустити запрограмований цикл дистиляції;
  11. Оттитровать дистилят ( можливо, за допомогою автоматичного титратора);
  12. Вичислити результати.

-стадия сульфатної мінералізації образца-

22f09ec6f0ed2a3a9e2f73e287b78813 VELP - визначення білку по методу Къельдаля.

Програмований мінералізатор

Електронний програматор з мікропроцесором для

встановлення температури і часу дижестирования

(значення температури від кімнатної до 450 ºЗ, часу – до

120 хвилин). Звуковий сигнал закінчення циклу

дижестирования. До 4 інтервалів для температури і

часу дижестирования. Є можливість продовження

операції дижестирования, якщо це необхідно.

Відповідає нормам GLP : виходи на комп’ютер і на

принтер.

У комплект постачання входить 6 скляних воронок для

фільтрування (використовуються як зворотні

холодильників).

2312772eff3141689e4e70cb7472a1e5 VELP - визначення білку по методу Къельдаля.

Утримувач пробірок із захисними екранами.

3658f680305945b1d578902b56586e98 VELP - визначення білку по методу Къельдаля.

Пробірки для мінералізації ø 42 x 300 мм (3 шт.) –

4 комплекти (Σ =12 пробірок).

87cdf8b8e374c249e43fc731fddc0de8 VELP - визначення білку по методу Къельдаля.

Каталізатор, використовуваний для сульфатного

дижестирования при визначенні протеїну (білка) по методу

Къельдаля (упаковка – 1000 пігулок).

d2ba41c656ab86d049a125da80abdd72 VELP - визначення білку по методу Къельдаля.

Човники для зважування з безазотной паперу MN

808, 58 х 10 х 10 мм, 100 штук.

66075122034bbc259cb9f9f8607cad62 VELP - визначення білку по методу Къельдаля.

Паровий дистилятор

Використовують для визначення азоту по методу

Къельдаля, зміст спиртів, аміаку, ціаніду

фенолу, летких кислот і в інших застосуваннях. Для

роботи приладу слід використати

деіонізовану або дистильовану воду.

Робить 100 мл дистиляту за 5 хвилин.

Додавання об’єму лугу і тривалість

процесу перегонки програмується перед

початком робочого циклу.

У комплект постачання входять:

Пробірка 42х300 мм, колба конічна на 250 мл

щипці для пробірки, набір шлангів для підведення і

відведення охолоджувальної води

61204be92e439beee72ecc7edbb9ec73 VELP - визначення білку по методу Къельдаля.

Газовідвідна кришка

6445c0d303834aee2f779acbaad286f2 VELP - визначення білку по методу Къельдаля.

Скрубер SMS – призначений для всмоктування токсичних і корозійних газів, що утворюються при окислювальній мінералізації і інших процесах.

a109bc0dcafefeff4021b62815b986f7 VELP - визначення білку по методу Къельдаля.

Рециркуляционный насос типу JP.

Рециркуляционный водяний вакуумний насос.

Продуктивність – 35 л/хв.